聯(lián)防聯(lián)控機制綜發(fā)〔2020〕221號《關(guān)于印發(fā)農貿（集貿）市場(chǎng)新型冠狀病毒環(huán)境監測技術(shù)規范的通知》（全文）

關(guān)于印發(fā)農貿（集貿）市場(chǎng)新型冠狀病毒環(huán)境監測技術(shù)規范的通知








聯(lián)防聯(lián)控機制綜發(fā)〔2020〕221號

各省、自治區、直轄市及新疆生產(chǎn)建設兵團應對新冠肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制（領(lǐng)導小組、指揮部）：

為科學(xué)規范指導開(kāi)展農貿（集貿）市場(chǎng)新冠病毒環(huán)境監測工作，深入開(kāi)展病毒溯源和疫情防控，我們組織編制了《農貿（集貿）市場(chǎng)新型冠狀病毒環(huán)境監測技術(shù)規范》?，F印發(fā)給你們，請參照執行。






 

國務(wù)院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制綜合組

2020年7月30日

農貿（集貿）市場(chǎng)新型冠狀病毒環(huán)境監測技術(shù)規范

農貿（集貿）市場(chǎng)是新冠肺炎疫情防控的重點(diǎn)場(chǎng)所，加強對農貿（集貿）市場(chǎng)新冠病毒環(huán)境監測，對于深入開(kāi)展病毒溯源和疫情防控意義重大。為科學(xué)規范指導開(kāi)展農貿（集貿）市場(chǎng)新冠病毒環(huán)境監測工作，特制定本技術(shù)規范。

一、監測對象

監測重點(diǎn)為具備區域輻射能力的大型農貿（集貿）市場(chǎng)，特別是包括冷凍、冷藏功能的肉類(lèi)和海鮮水產(chǎn)交易攤位，或者存在潮濕、密閉空間的市場(chǎng)。

二、監測內容

（一）市場(chǎng)內重點(diǎn)攤位的設施、用具表面病毒檢測。重點(diǎn)對攤位臺面、面板、地面、把手，以及各種制作和使用器具等表面，包括脫毛或切割機械、刀具等，采集拭子樣本。

（二）市場(chǎng)內重點(diǎn)攤位從業(yè)人員咽拭子、衣物表面、手部病毒檢測。對處于工作狀態(tài)的從業(yè)人員手部表面，采集拭子樣本。

（三）市場(chǎng)內重點(diǎn)攤位存放食品的冰箱、冷藏柜內部表面病毒檢測。對儲藏食物過(guò)程中經(jīng)常觸及的冰箱、冷藏柜內表面，采集拭子樣本。

（四）市場(chǎng)內銷(xiāo)售的肉、禽類(lèi)和海鮮水產(chǎn)類(lèi)食品的病毒檢測。對市場(chǎng)內銷(xiāo)售的食品應當按照無(wú)包裝食品和有包裝食品加以區分，其中有包裝類(lèi)食品重點(diǎn)是需要冷藏運輸的肉、禽類(lèi)和海鮮水產(chǎn)類(lèi)食品，采集拭子樣本。

（五）市場(chǎng)內排水系統中污水的病毒檢測。重點(diǎn)包括市場(chǎng)內海鮮水產(chǎn)、肉禽類(lèi)產(chǎn)品攤位來(lái)源的污水，采集拭子樣本或污水樣本。

（六）市場(chǎng)內公共空間中人員接觸較多的部位，包括主要進(jìn)出口的電梯按鈕、樓梯扶手、門(mén)把手表面，茶水間、衛生間等公用設備設施表面，潮濕的公共通道和衛生間地面、墩布池等采集拭子樣本。

（七）市場(chǎng)內經(jīng)常性跨區域移動(dòng)的工具或物品，包括垃圾車(chē)、垃圾桶、墩布等清潔工具，轉運物品的拖車(chē)等，采集拭子樣本。

（八）市場(chǎng)內工作人員聚集、通風(fēng)不良的環(huán)境，包括辦公室、工具間、休息間、局部交易環(huán)境等環(huán)境拭子及氣溶膠樣本。

三、樣本采樣

（一）樣本要求。

1.從業(yè)人員咽拭子、手部、衣物和其他物體表面拭子樣本：要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集的手部或物體（包括公共通道的地面）的表面重復涂抹、涮洗3次以上。同時(shí)要滿(mǎn)足對采樣對象表面，進(jìn)行多點(diǎn)分布式采樣。

2.食品表面拭子樣本：食品樣本不可直接進(jìn)行采集，應當首先將擬采集的食品小心分離，并存放于潔凈采樣袋后，再進(jìn)行拭子樣本的采集。要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集食物樣本的表面重復涂抹、涮洗3次以上。同時(shí)要滿(mǎn)足對樣本表面，進(jìn)行多點(diǎn)分布式采樣。

3.污水樣本：按照市場(chǎng)內排水系統分布情況，選取2-3處污水采樣位置，重點(diǎn)為內部管網(wǎng)匯集處、水流方向的下游或與市政管網(wǎng)的連接處。采集拭子樣本要求，用采樣棉簽浸入污水中，使其吸附污水并在采樣管中對涮洗3次以上。采集污水樣本要求，用聚乙烯塑料瓶收集30-500mL污水水樣；大于500mL體積的污水采集可以使用聚乙烯塑料桶或現場(chǎng)水樣專(zhuān)用富集設備。同時(shí)要滿(mǎn)足對污水采樣位置，進(jìn)行多點(diǎn)分布式采樣。

4.動(dòng)物樣本：對于活體動(dòng)物，可分別用采樣棉簽采集其體表拭子、口咽拭子和肛拭子，也可以采集其排泄物或分泌物樣本，并在記錄單上進(jìn)行相應記錄。對于以經(jīng)過(guò)剝皮等處理的動(dòng)物樣本，分別用棉簽采集其體表和體腔拭子樣本，要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集食物樣本的表面重復涂抹、涮洗3次以上。同時(shí)要滿(mǎn)足對樣本表面，進(jìn)行多點(diǎn)分布式采樣。

5.其他器具：籠具或魚(yú)缸等裝運、養殖動(dòng)物的容器，需首先觀(guān)察或了解該容器具體存放、養殖過(guò)的動(dòng)物類(lèi)型，采集容器內壁拭子樣本或內容物液體樣本。

6.人員聚集、通風(fēng)不良的局部交易區域、辦公室、休息間等環(huán)境采集氣溶膠樣本。

（二）采樣方法。

1.采樣周期：對重點(diǎn)大型集貿市場(chǎng)（特別是銷(xiāo)售生鮮類(lèi)產(chǎn)品的市場(chǎng)）按照1次/周，對其余需要監測的集貿市場(chǎng)按照1次/月的頻次進(jìn)行病毒監測。

2.采樣實(shí)施：現場(chǎng)采樣由兩名以上的工作人員參與完成，采樣時(shí)應當穿戴防護服、防護口罩、鞋套和醫用一次性手套。采樣過(guò)程需開(kāi)啟現場(chǎng)采樣視頻記錄設備。

3.采樣裝備：病毒采樣箱、病毒采樣管、氣溶膠采集器、樣品記錄單、手消設備、潔凈采樣袋、冰袋、高危險生物樣本轉運箱和生物安全垃圾袋等。

4.采樣記錄：樣本信息應當包括樣本采集的采樣時(shí)間、地點(diǎn)、集貿市場(chǎng)名稱(chēng)、攤位編號、采樣類(lèi)型、樣本編號以及采樣人等信息。

5.采樣操作：采樣開(kāi)始前，要求穿戴防護服、口罩、鞋套和手套等個(gè)人防護用品進(jìn)入采樣現場(chǎng)，并使用手消進(jìn)行手部消毒。拭子樣本采樣過(guò)程中，采樣棉簽只能接觸當前采集的樣本，避免觸碰到其他物體。污水樣本采集前，先充分攪勻，然后取樣。污水分三層以上，不能攪勻時(shí)，可按各層量的多少的比例分層取樣。氣溶膠樣本采集使用氣溶膠采集器，設定采集高度、空氣通量和采集時(shí)間，進(jìn)行氣溶膠采集，將采集后的吸收液或濾膜放置在特定的低溫容器進(jìn)行轉運。采樣結束后，清理廢棄物后離場(chǎng)。

6.樣品轉運：采集樣品連同采樣記錄單應當在24小時(shí)內運送至當地指定的病毒監測機構進(jìn)行檢測，樣本建議冷藏存放于高危險生物樣本轉運箱中，并由專(zhuān)人、專(zhuān)車(chē)進(jìn)行轉運。

四、檢測

（一）樣本分裝和保存。

1.樣本分裝：標本采集后應當在生物安全二級實(shí)驗室生物安全柜內分裝，但個(gè)人防護裝備參照生物安全三級實(shí)驗室的防護要求。所有采集對環(huán)境標本應當分裝到大小適合的帶螺旋蓋內有墊圈、耐冷凍的樣本采集管里，按照1000ul/管進(jìn)行分裝。容器(采集管)外注明樣本編號、種類(lèi)及采樣日期。用于后續核酸提取和病毒分離等實(shí)驗室檢測工作。

2.樣本保存：用于病毒分離和核酸檢測的標本應當盡快進(jìn)行檢測，能在24小時(shí)內檢測的標本可置于4℃保存；24小時(shí)內無(wú)法檢測的標本則應當置于-70℃或以下保存（如無(wú)-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存）。

（二）污水水樣前期處理。使用離心技術(shù)去除污水中雜質(zhì)。先打開(kāi)低溫離心機，待溫度降至4℃左右，建議4654離心力離心30分鐘，取上清。再使用膜吸附技術(shù)或超濾技術(shù)進(jìn)行上清液的濃縮。

（三）核酸提取。新型冠狀病毒的常規檢測方法是通過(guò)實(shí)時(shí)熒光RT-PCR鑒定。任何新型冠狀病毒的檢測都必須由經(jīng)過(guò)相關(guān)生物安全及技能培訓的人員進(jìn)行操作。對已經(jīng)滅活的樣本，應當在生物安全二級（BSL-2）實(shí)驗室內，使用自動(dòng)化核酸提取儀，配套核酸提取試劑盒進(jìn)行病毒核酸的提取。核酸提取后，應當將核酸產(chǎn)物進(jìn)行分裝，用于后續核酸實(shí)時(shí)熒光定量（RT-PCR）及深度測序。核酸提取操作參考相關(guān)廠(chǎng)家試劑盒說(shuō)明書(shū)開(kāi)展。

（四）實(shí)時(shí)熒光定量PCR。在BSL-2實(shí)驗室中對所有已提取的核酸樣本，應當用經(jīng)CFDA批準的RT-PCR診斷試劑進(jìn)行新型冠狀病毒核酸檢測，以保證實(shí)驗結果的正確可靠。RT-PCR反應體系和操作參考相關(guān)廠(chǎng)家試劑盒說(shuō)明。每一次RT-PCR反應均應當設置陰性對照、陽(yáng)性對照和無(wú)模板空白對照，以確保擴增體系工作正常。

五、實(shí)驗室生物安全

實(shí)驗室安全級別參照最新版《新型冠狀病毒實(shí)驗室生物安全指南（第二版）》的相關(guān)內容進(jìn)行管理。采集的環(huán)境樣本屬于未經(jīng)培養的感染性材料，在采用可靠的方法滅活前進(jìn)行的病毒抗原檢測、血清學(xué)檢測、核酸提取、生化分析，以及臨床樣本的滅活等操作，應當在生物安全二級實(shí)驗室進(jìn)行，同時(shí)采用生物安全三級實(shí)驗室的個(gè)人防護。環(huán)境樣本在采用可靠的方法滅活后進(jìn)行的核酸檢測、抗原檢測、血清學(xué)檢測、生化分析等操作應當在生物安全二級實(shí)驗室進(jìn)行。




附表：新型冠狀病毒環(huán)境檢測標本送檢表

 

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